遗传标志筛选-插入失活

贡献者:星晨炼 类别:简体中文 时间:2022-09-27 16:04:11 收藏数:2 评分:0
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遗传标志筛选-插入失活
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插入失活
是利用了 插入位点,
使得 质粒原有的 性状或者是本领
被破坏了。

比如说
经常用到的质粒 pBR322
这个质粒携带有 两种遗传标记的基因,
一个是抗氨苄的,
一个是抗四环素的。

那我们用这个质粒 来重组 DNA 的时候,
自然把这个载体 切割开,
目的 DNA 要加进去,
但是非常巧的是,
它的多克隆位点 恰好在 抗四环素 的编码基因序列中。

所以由于你外源基因片段的插入,
使得抗四环素 这个本领 丧失掉了。
这就是一个插入的失活。

在具体的工作中,
用这个载体携带 目的 DNA。

然后在同样的两个屏板上,
进行相同对应位置的一个接种
来进行培养。

这两个屏板,
一个是含有 氨苄的,
一个是含有 四环素的。

在相应的环境中
对应把你的菌落种植上去之后呢
进行培养,
最后进行比较。

如果外源基因正确插入了 pBR322 的载体,
它把四环素 抗性基因破坏了,
那么含有这种正确的 重组载体的菌落
只能够 对抗氨苄,
而不能够 对抗四环素。

在含有氨苄的屏板上 它是能够正常的生长起来,
但是在含有四环素的屏板上 是不能够生长的。

这样一对应,
我们就找到了那些菌落
是我们正确的 重组体了。

这就是一种插入的失活
来筛选的。
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