目的 DNA 与 载体 的连接
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当我们把 目的 DNA 和 载体 都准备好之后，
下一步 我们就应该 切割连接了。
用到 内切酶 和 连接酶。
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两种连接方式，比较一下哪种连接方式更好。
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首先，
一条染色体上有 目的 DNA，
这个 目的 DNA 两侧
都是同一种 内切酶 EcoR1 的切割位点。
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用相同的酶 去切两个位点，
虽然用的是 粘性末端，
但是把 目的 DNA 切下来之后，
目的 DNA 的两个末端 自然就形成了一个互补的序列。
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当目的片段得到之后，选择载体，
同样，
载体 肯定也要用 EcoR1 去切，
切完之后，
载体被切完的两端，也是互补的。
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当然，
目的 DNA 和 载体
它们 各自的末端 也是互补的。
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如果马上进行连接，
连接的结果会有三种可能的情况：
我们期望的是 目的 DNA 和 载体在一起。
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但是不可避免的 会出现 载体自身的连接，
因为它们两个末端是互补的，
同时也会出现 目的 DNA 片段的连接，
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这一切都是因为用了同一种酶去切。
这个结果并不是我们想要获得的。
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在实际工作中，
我们尽量去选择所谓的 定向克隆。
那么定向克隆 又是指什么呢？
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再来看这个例子：
在一条染色体上 需要的目的 DNA 片段
经过序列的查找，
发现它的两侧恰好是两种不同的内切酶 的切割位点，
当然就选择两种酶 去切。
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当它切开之后，
我们此刻得到的这个目的 DNA
被切开的两个末端 它并不互补，
它的粘性末端是不一样的。
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再用这两个酶，同样也去切载体，
载体被切开之后，
扔掉了中间一小片段，
得到的 两个末端也不互补。
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所以，
用两种不同的内切酶
分别去切 目的 DNA 和 载体，
最后 我们获得的结果
是在目的 DNA 和 载体 之间
存在了 互补配对的可能性。
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我们再把它们放在一起进行连接，
自然而然只能有一种连接结果，
这就是所谓的 定向克隆。